抗核抗体

抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如系统性红斑狼疮（SLE，95%～100%）、类风湿性关节炎（RA，10%～20%）、混合性结缔组织病（MCTD，80%～100%）、干燥综合征（SS，10%～40%）、全身性硬皮病（85%～90%）、狼疮性肝炎（95%～100%）、原发性胆汁性肝硬化（95%～100%）等。但经皮质激素治疗后，阳性率可降低。抗核抗体在类风湿病患者中约有20%～50%IgG型ANA呈阳性，小儿类风湿ANA的阳性率约19%～35%，伴发虹膜睫状体炎者阳性率高（50%～90%），故ANA阳性预示类风湿有发生慢性睫状体炎的可能。已发现75%类风湿病患者有多形核白细胞的特异性ANA或抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）可使白细胞核受到破坏。

分类

抗核抗体的分类，由于核抗原不同，有多种不同的ANA。

抗核抗体抗DNA抗体
抗DNA抗体有抗双链DNA（dsDNA）和抗单链DNA（ssDNA）抗体之分。抗双链DNA抗体与SLE的关系密切，且随疾病的活动度而升降，病情好转者其滴度多下降甚或转阴。抗单链DNA抗体则与抗双链DNA不同，可在多种疾病出现，包括一些非自身免疫性疾病，如细菌和病毒感染。故在临床上无实用价值。而抗双链DNA抗体被认为是红斑狼疮（SLE）所特有。

抗DNA的自身抗体在SLE发病中起一定作用。在一些SLE患者，DNA大分子存在于循环中或黏附于多种器官的微血管结构，这些循环或器官原位抗原型DNA均可与循环自身抗体发生反应，形成免疫复合物，激活炎症系统，在一些器官如肾、肺和脑组织引起免疫复合物介导的疾病，导致组织损伤。

抗可提取的核抗原
抗可提取的核抗原（extractable nuclear antigen; ENA）抗体。此抗体原经盐水或磷酸缓冲液处理，易从胞核中提取出来，且不含DNA。应用免疫荧光技术，抗ENA抗体型染色多呈斑点型。此类抗原当前分为九种，故产生九种相应抗体。

抗核糖核蛋白抗体(antiribonucleoprotein)：亦称抗RNP抗体。抗原来源与SM相同。它对去氧核糖核酸酶不敏感，但对核糖核酸酶、胰酶敏感。1972年将其作为诊断混合性结缔组织病（MCTD）的重要血清学依据。但以后发现本抗体可在多种风湿性疾病出现，不具备对某个病的特异性，但有助于鉴别结缔组织病和非结缔组织病。抗核RNP抗体见于近32%的SLE患者，几乎见于所有MCTD患者。

抗SM抗体：SM系一患者Smith的简称。1966年Tan&Kunkel首先在患者Smith体中发现。抗原来源于小牛、兔胸腺、人脾等组织的一种酸性糖蛋白。抗SM抗体可见于1/3或以上的SLE患者，不出现于其他疾病中，对SLE诊断有特异性，成为很有价值的SLE诊断标志，但无此抗体不能排除诊断。

抗SS-A抗体：系在发现Sjogren氏综合征（SS）的“A”抗原后而命名，主要见于SS。本抗原可以从人、牛、猪脾中提取。它除存在核内外，也存在于细胞浆内。对胰酶敏感，对核糖核酸酶抵抗，能耐热（56℃）。

抗Ha抗体：抗Ha抗体可与小牛胸腺可溶性核提取物（以及小牛和鼠的肝提取物）起反应。见于SS患者，亦称之为SS-B抗体。应用沉淀素反应，补体结合以及荧光技术检测。多数人认为13%SLE及33%SS患者有抗Ha沉淀性抗体。

抗PM-1抗体：系多发性肌炎的特异性抗体。抗原系小牛胸腺核提取物，有人暂称之为PM-1。最初有人应用补体结合抑制试验，确定该抗体特性，在皮肌类患者中发现PM-1抗体。有人测定在多发性肌类患者阳性率13.6%，皮肌类（DM）20%，系统性硬化并肌炎25%，SLE并肌炎偶有阳性，在其他疾病和正常人均阴性。说明本抗体对肌炎诊断有一定特异性。

抗MA1抗体：为发现抗核酸蛋白抗原的抗体，称之为抗MA1抗体。该抗体只出现于某些严重的SLE患者中。

抗Scl-70抗体：因出现在硬皮病且其分子量为70000，故名。抗原为碱性非组蛋白，北京协和医院对系统性硬化用免疫双扩散法测定得抗Scl-70抗体阳性率为60%。在其他结缔组织和非结缔组织病偶有阳性，而正常人均阴性，说明本抗体有较高的特异性，是系统性硬化的标记抗体。

抗Jo-1抗体：因患者而命名。国外报道在多发性肌炎（PM）患者阳性率为30%～50%，合并有肺间质纤维化的肌炎则达60%，而在皮肌炎（DM）患者则低于10%，在其他疾病均阴性。

抗Ku抗体：因患者命名，报道本抗体多见于合并有肌炎的系统性硬化患者，阳性率达55%。

总之，抗PM-1，抗Jo-1，抗Ku都与肌炎有关。

抗核抗体抗组蛋白抗体
组蛋白是一组碱性蛋白质，含有稍高量的赖氨酸及精氨酸。是与DNA形成的复合物，结合成DNA一组蛋白。组蛋白抗体见于药物诱发的SLE。报道用免疫荧光三步法测23例药物致狼疮阳性率为96%，12例SLE中42%阳性。北京协和医院以同样方法检测488例服用异烟肼，68例服用苯妥英钠，40例服用复降片（内含肼苯哒嗪），都在服用6个月以上者和另133例服他巴唑3个月以上者，无1例查到本抗体。这种差异可能与中国服用肼苯哒嗪和普鲁卡因酰胺的患者较少之故，也不能除外人种不同而造成的差异。

抗核抗体抗着丝点抗体
其抗原为紧附于染色体着丝点的DNA蛋白质。因此需要选择分裂相活跃的细胞作为底物，这种细胞的着丝点较易被暴露。多选用人喉癌上皮细胞（HEP-2），其优点是核大，分裂相多。国外报道本抗体多见于CREST综合征（即表现为软组织钙化，雷诺现象，食管功能低下，指端硬化，毛细血管扩张）。阳性率达90%以上，称之为CREST的标记抗体。根据协和医院观察测定结果，中国系统性硬化绝大部分是弥散型，CREST型极少见；抗着丝点抗体的阳性率在系统性硬化为20%，CREST型38%，弥散型10%，说明它不一定是CREST型的标记抗体。

抗核抗体抗核仁抗体
抗核仁抗体是一组对核仁不同RNA成分的抗体。由于成分（4-6sRNA）不同，因此构成斑块、斑点、均质等不同图形。本核体在以HEP-2细胞为底物间接免疫荧光检查为明显。协和医院免疫组的阳性率是PSS38.5%、SLE6.1%、RA15.3%（阳性者都合并有指端硬化）、SS8.6%、PM/DM10.0%、雷诺现象25%，其他结缔组织病和正常人均阴性。抗核仁抗体不仅在PSS最多见，且滴度亦高，故它对PSS诊断有一定的帮助。

抗核抗体的检测在自身免疫病的临床诊断、鉴别诊断、评价疗效和预后估计中具有较大的意义，因此常将抗核抗体的检测作为自身免疫病的重要初筛试验。

抗核抗体临床意义

SLE：约99%（86%～100%）的活动期SLE患者ANA阳性，其滴度也常为1:80，但它的特异性差。对于未经治疗的疑似患者，多次检查抗核抗体，若结果阴性，应考虑其他疾病的可能。ANA阳性本身不能确诊任何疾病，但ANA阳性且伴有特征性狼疮症状则支持狼疮诊断。ANA阴性几乎可除外SLE的诊断。但应注意有5%的SLE患者ANA可为阴性，这其中大部分为抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性，因为测定ANA通常用鼠肝或鼠肾做底物，而这些组织核内含SSA、SSB、Jo-1、rRNP抗原相对较少，所以不易测出其相应抗体。可加做人喉癌上皮细胞为底物的方法进行检测。

抗核抗体阳性意义

ANA为一系列抗细胞核抗原的自身抗体的总称。一般应用免疫荧光的方法检测。根据核荧光的类型分为以下几种类型：
①周边型（M型）：核周边的荧光增强呈环状。M型的ANA主要有抗双链DNA抗体组成，故高滴度的M型ANA几乎仅见于SLE，因此有助于SLE的诊断。
②均质型（H型）：整个细胞核呈一片模糊而均匀的荧光。H型的ANA主要有抗脱氧核蛋白抗体组成。高滴度的H型ANA主要见于SLE，而低滴度H型ANA偶可见于药物性狼疮，JRA等其他自身免疫性疾病。
③斑点型（S型）：核内荧光呈颗粒状。是有抗Sm抗体，抗SSB/La抗体、抗Scl-70抗体等多种抗体组成。因此S型ANA可见于SLE、混合性结缔组织病（MCTD）、硬皮病（PSS）、干燥综合征（SS）、多发性肌炎及皮肌炎（PM或DM）等自身免疫病。

抗核抗体检测方法

由于ANA的复杂性及多样性，故测定方法繁多。ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。

免疫荧光法
检测血清总ANA最常用的方法是荧光免疫组化法。多用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，结果比较稳定可靠，在荧光显微镜下见到的细胞核有荧光着色为阳性反应。如将患者血清先进行不同比例的稀释，可以做大致的定量试验，在1:80稀释仍然虽阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。在油镜下观察结果，可以将ANA阳性的荧光现象分成四种主要的荧光核型，核型的确定对临床诊断有进一步的参考价值。
①周边型：表示抗DNA抗体存在；
②均质型：表示有抗DNP抗体；
③斑点（颗粒）型：多为抗ENA抗体；
④核仁型：多为抗核小体抗体。
SLE患者常出现周边型、匀质型或混合型。斑点型多见于混合结缔组织病；而硬皮病多为核仁型；周边型对SLE有较高的特异性。

有人用锥虫或血鞭毛虫（例如绿蝇短膜虫试验）作基质测定抗dsDNA抗体，因为这些血寄生虫的动基体内含大量的纯dsNDA，无其他抗原干扰；在阳性结果时，可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。因此该试验用于测定抗dsDNA抗体具有特异性强和敏感性高的优点。另外，短膜虫对人畜无害，可以人工养殖，来源方便，值得推广。

ELISA
临床上主要是应用间接ELISA检测抗dsDNA抗体，其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。已有试剂盒供应。

免疫印迹
先将混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然将这些带转印到硝酸纤维素膜上，最后用酸标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析。由于该试验不需纯化的单个抗原，可在同一固相上作多项分析检测，灵敏度高，特异性强。故已广泛用于自身免疫病患者血清中多种自身抗体的检测，如检测抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SS-A抗体及SS-B抗体等。

另外，还可用传统的琼脂双向扩散法、对流免疫电泳法、间接血凝法和补体结合试验等。