确定内分泌功能状态的重要方法。
抑制试验
用于测定内分泌系统负反馈抑制机制的完整性，有无自主性激素分泌过多，是否有功能性肿瘤存在，多适用于分泌功能亢进的情况。抑制的方法有：
①给外源激素抑制内生激素的分泌，不能再以血激素水平为腺体分泌功能指标，应另选诊断指标，如地塞米松抑制试验。
②改变血代谢物质浓度，以抑制相应内分泌腺功能，如口服葡萄糖抑制血生长激素水平，给予盐水抑制醛固酮的分泌。
③给予抑制性下丘脑激素，如左旋多巴（在体内转变为多巴胺）抑制PRL分泌。
内分泌疾病诊断的步骤首先是确定内分泌的功能状态，然后才做定位、病因、诱因及并发症的检查，而血液激素浓度是内分泌腺功能的直接证据。尽管已将体液激素水平测定的敏感度提高到超微水平，但在下述情况时单凭测定血激素水平仍不能区分正常与异常：
①某些激素的正常范围太大，若不知患者病前水平，对其病后激素水平的解释常不准确，如病前血甲状腺素（T4）水平在正常低限，升至正常高限已表明患有甲状腺功能亢进。
②微小的内分泌功能改变经负反馈代偿后，其基础激素水平仍正常，如部分性肾上腺皮质功能减退，因ACTH分泌代偿性增加，血皮质醇水平及分泌率可达正常。
③许多内分泌疾病的恢复期，如垂体瘤部分垂体切除后及给患者暂时性补充激素，患者血激素基础值高低不反映患者对激素需要程度。可以通过以下三方面检查来确诊较轻微的内分泌功能改变。
连续测定激素谱
患病时激素分泌的波动可能是病情波动或激素分泌节律的改变。病情波动者应多次测定激素，如甲状旁腺功能亢进须多次测定血钙及甲状旁腺素（PTH）水平。正常人激素分泌昼夜节律个体差异较大，且受很多因素影响，如睡眠形式、药物（尤其是影响中枢神经系统功能的药）、精神状态及应激。
测定成对的上下级激素
同时测定促激素及靶腺激素比单测其中一种激素能得到更多的信息，因其可反映激素负反馈调节功能。如血甲状腺素（T4）水平的正常高限值约比正常低限值高1倍，若测得正常低限值T4，但伴有高促甲状腺激素（TSH）水平则表明甲状腺功能减退。
动态功能试验
利用激素之间反馈性调节的原理进行的动态功能检查。此项实验不仅可确定诊断，还可帮助了解病变的部位。如男性性功能减退时黄体生成素（LH）对黄体生成素释放激素（LHRH）兴奋有反应则代表垂体合成及分泌LH的功能是完整的，病变可能在下丘脑。动态功能试验分为兴奋试验及抑制试验两种（见表）。
兴奋试验
应用促激素试验探测靶腺反应，可估计激素的储备功能，多适用于分泌功能减退的情况。尤其对下列四种内分泌功能减退情况有用：
①定量测定激素低水平的方法不够敏感。
②激素静态水平在正常低限值。
③区分内分泌功能衰竭是原发性还是继发性。
④青春前期患者血促性腺激素和性类固醇水平尚不能说明情况时。
兴奋试验偶也可用于协助内分泌腺功能亢进的诊断。如甲状腺功能亢进时，TSH对促甲状腺素释放激素（TRH）的兴奋反应迟钝。兴奋试验也可用于诊断内分泌受体病，如肾性尿崩症对抗利尿激素无浓缩尿反应。
| 激素分泌的动态试验类型 | ||
| 动态试验 | 检测指标 | 诊断意义 |
| 兴奋试验 | ||
| TRH兴奋试验（少用） | TSH | 甲亢/ATD停药/Graves眼病/甲减定位诊断 |
| GH | 垂体矮小症 | |
| PRL | 泌乳素瘤 | |
| GnRH兴奋试验 | LH/FSH | 性腺功能减低定位诊断 |
| GHRH刺激试验 | GH | 下丘脑-垂体性矮小症/异位GHRH综合征/肢端肥大症术后评估 |
| CRH刺激试验 | ACTH | 腺垂体功能减退症 |
| 皮质醇 | 继发性垂体性肾上腺皮质功能减退症 | |
| ACTH兴奋试验 | 血皮质醇/17-OHCS和17-KS | 原发性肾上腺皮质功能减退症 |
| 醛固酮 | 糖皮质激素依赖性醛固酮增多症 | |
| TSH兴奋试验（少用） | 甲状腺131I扫描 | 自主功能性甲状腺结节 |
| HCG刺激试验 | 睾酮 | 原发性睾丸功能减退症 |
| 胰岛素低血糖试验 | GH | GH缺乏症 |
| 胰升血糖素刺激试验 | 血糖 | 胰岛细胞瘤 |
| 血压 | 嗜铬细胞瘤 | |
| GH | GH缺乏症 | |
| L-多巴试验（少用） | GH | GH缺乏症 |
| L-精氨酸试验（少用） | GH | GH缺乏症 |
| 垂体加压素试验 | GH | GH缺乏症 |
| 甲氧氯普胺（胃复安）试验 | PRL | 腺垂体功能减退症 |
| 组胺激发试验（少用） | 血压 | 嗜铬细胞瘤 |
| 酪胺试验（少用） | 血压 | 嗜铬细胞瘤 |
| 氯丙嗪兴奋试验 | PRL | 泌乳素瘤 |
| 氯米芬试验 | 血FSH/LH/睾酮 | 垂体促性腺激素缺乏症/原发性睾丸功能减低症/神经性厌食 |
| 滴钙试验（少用） | CT | 甲状腺髓样癌 |
| 五肽胃泌素刺激试验 | CT | 甲状腺髓样癌 |
| 胰泌素刺激试验 | 血胃泌素 | 胃泌素瘤 |
| 糖耐量-胰岛素释放试验 | 血糖/胰岛素（C肽） | 糖尿病分型/胰岛素瘤/低血糖症 |
| 菸碱试验（少用） | 尿量/尿比重/尿渗透压 | 中枢性尿崩症 |
| 美替拉酮试验（少用） | 尿17-OHCS/17-KS/11-去氧皮质醇 | 下丘脑CRH和垂体ACTH鉴别/肾上腺皮质腺瘤与增生鉴别 |
| 高渗盐水试验 | 尿量/尿比重/尿渗透压 | 中枢性尿崩症 |
| 低钙试验 | 尿钙 | 甲状旁腺功能评估 |
| 甲状旁腺素刺激试验（少用） | 尿cAMP | 假性甲旁低Ⅰ型和伴纤维囊性骨炎的假性甲旁低 |
| 立卧位试验 | GH/血醛固酮 | 垂体矮小症/特发性原醛症与醛固酮瘤鉴别 |
| 抑制试验 | ||
| T3抑制试验（少用） | 甲状腺摄131I率 | 单纯性甲状腺肿与毒性甲状腺肿鉴别/甲亢/Graves眼病/甲亢用抗甲状腺药治疗后停药 |
| 葡萄糖抑制试验（少用） | GH | 生长激素瘤 |
| 小剂量DXM抑制试验 | 尿17-OHCS/17-KS | 肥胖与皮质醇增多症鉴别 |
| 过夜DXM抑制试验 | 血皮质醇 | 肥胖与皮质醇增多症鉴别 |
| 大剂量DXM抑制试验 | 尿17-OHCS/17-KS | 肾上腺皮质腺瘤与增生鉴别 |
| 卡托普利（巯甲丙脯酸）试验 | 血肾素活性和醛固酮 | 原醛症 |
| 胰岛素抑制试验（少用） | 血C肽 | 胰岛素瘤 |
| 螺内酯试验 | 血钾/血压/尿钾 | 原醛症 |
| 酚妥拉明试验（少用） | 血压 | 嗜铬细胞瘤 |
| 负荷试验 | ||
| 高钠试验 | 血钠/钾/氯化物/尿钾钠 | 原醛症 |
| 钾负荷试验 | 血钠/钾/氯化物 | 原醛症/原醛症与其他低钾血症鉴别 |
| 水负荷试验（立卧位） | 立卧4小时尿量 | 特发性水肿 |
| 皮质素-水负荷试验（少用） | 尿量（4小时总量） | 肾上腺皮质功能减低症 |
| 静滴生理盐水试验 | 血皮质醇/18-羟皮质酮/醛固酮 | 原发性醛固酮瘤 |
| 耐受试验 | ||
| 口服糖耐量试验 | 血糖/尿糖 | 糖尿病/反应性低血糖和胰岛素瘤 |
| 静脉葡萄糖耐量试验 | 血糖/尿糖 | 糖尿病/反应性低血糖和胰岛素瘤 |
| 禁水试验 | 尿量/尿比重/血尿渗透压 | 中枢性尿崩症 |
| 禁水-垂体加压素试验 | 尿量/尿比重/血尿渗透压 | 中枢性尿崩症/完全性与部分性尿崩症鉴别/多尿的鉴别 |
| 饥饿试验 | 血糖与胰岛素 | 胰岛素瘤 |
| 其他试验 | ||
| 过氯酸钾排泌试验 | 甲状腺摄131I率 | 甲状腺碘有机化障碍判断 |
应用于诊断的限制
20世纪以前，人们根据激素的反馈调节理论和环境因素调节内分泌代谢功能的原理，在内分泌代谢疾病的诊断中设计了许多激素的动态试验，其中一些激素动态试验目前仍是诊断的重要手段。如TRH和GnRH兴奋试验可判定甲状腺和性腺功能减退症的病变部位。血清基础TSH升高，注射TRH后有过分反应，提示病变在甲状腺；基础TSH降低，注射TRH后无升高反应，提示病变在垂体；如果注射TRH后TSH有升高反应，但高峰延迟，则病变在下丘脑。但是随着科学技术的进步，尤其是下丘脑激素测定和高分辨影像检查的应用，激素动态试验在诊断中的地位在逐渐下降，有些敏感性和特异性较差或不良反应较大的动态试验已经少用或被淘汰。
激素动态试验应用于诊断的限制，还主要有以下原因：
①内分泌动态功能试验的正常范围尚未在大量正常人中测定，尤其是未在无内分泌病的其他患者中测试。
②正常人对动态功能试验的反应常因性别及年龄而不同，如60岁以上男性TSH对TRH反应减低，但女性不减低。
③正常人对动态功能试验的重复性差。
④长期缺乏促激素而继发萎缩的靶腺须多日兴奋方有正常反应，若萎缩严重不可逆，虽多日兴奋仍无反应。
⑤有些内分泌病变可有不寻常的反应，如库欣病患者服地塞米松后可因肾上腺分泌皮质醇的内在节律的不规则改变，皮质醇的分泌反显增加。
⑥靶腺功能衰竭所致的代偿性垂体增生也可表现似功能自主。
⑦轻型对激素抵抗综合征易被漏诊。
⑧合并其他内分泌功能紊乱、内科病及精神病常影响试验结果的特异性。
⑨服用药物可影响试验结果，因此解释动态内分泌功能试验时应谨慎。